品的固定、包埋和切片是生物医学研究、组织学分析和病理学诊断中非常重要的步骤，正确操作有助于保持组织结构的完整性、保存生物分子的空间位置以及获得高质量的实验结果。上期我们介绍了关于样品固定与包埋的相关内容[插入对应推文链接]，这期小编继续为大家介绍样品固定包埋之后的又一关键步骤——切片。切片结果的好坏将直接影响后续实验如原位杂交、免疫组化等检测效果。 目前最常用的两种组织切片方法是冰冻切片和石蜡切片，两

流式细胞技术（Flow Cytometry，简称FCM）是一种高效的方法，用于分析和收集细胞悬液中的单个细胞。FCM的优势在于其速度快、结果客观，并且具有重要的统计意义。它能够处理复杂的样本，同时收集多个参数，其可靠性和重复性都非常出色。 今天我将总结并分享一系列关于流式细胞技术的常见问题及其分析。对于流式细胞术的原理和步骤不甚清晰的同学，建议先阅读本公众号以往的文章，了解背景知识。 1.荧光抗体染色无信号或信号弱 （1）加入的抗

引物合成和基因合成是两种不同的技术，它们在合成长度上的差异主要是由于它们各自采用的化学合成方法和应用目的不同。引物合成： 引物通常是短的单链DNA片段，长度一般在15-30个碱基对（bp）之间。 引物合成通常采用固相合成技术，通过逐个添加碱基的方式构建序列。 当引物长度超过200bp时，合成的难度和成本会显著增加，因为固相合成的准确性会随着序列的延长而降低，同时，合成过程中的副反应和杂质积累也会增加。基因合成： 基因合成

逆转录常见问题与解决办法： 1.可以通过测逆转产物cDNA浓度判定逆转效率吗？ 不可以。逆转录产物cDNA是混合物，除了cDNA产物以外，还有buffer、逆转录酶、引物，同时还包含未转录的模板RNA，总RNA中的tRNA、rRNA等，都会干扰浓度测定结果，因此不能反应真实的cDNA产量。 2.如何检测RNA逆转录成功与否？ 1) 内参法：理论上，逆转录的cDNA是长度不同的DNA片段，所以电泳条带应该均匀分布在泳道上，如果RNA丰度低，电泳检测也可能无产物，这种情况通过PCR扩

在分子生物学中，有许多常用的PCR引物设计软件，这些软件可以帮助研究人员设计特异性的引物，以便在PCR反应中准确地扩增目标DNA片段。以下是一些常用的PCR引物设计软件：1. Primer-BLAST： - 这是美国国立卫生研究院（NIH）开发的一个在线工具，用于设计引物并对引物的特异性进行评估。它可以根据用户提供的序列设计引物，并检查引物与非目标序列的互补性。2. Primer3： - Primer3是一个广泛使用的引物设计软件，它可以根据用户指定的参数设计引物，

TAE和TBE TAE缓冲液 实验之中经常将TAE配制成10× 或者 50× 的储液，实验前稀释储液到1×的工作液。1x TAE 缓冲液的成分是： 40 mM Tris (pH 7.6) 20 mM acetic acid 1 mM EDTA 50x TAE储液配制方法： 将Tris(FW=121) 242g，100 ml 0.5 M EDTA， 57.1 ml的冰醋酸溶解在600 ml的去离子水中；而后调节pH至8.3，加去离子水定容至1L后，室温保存。 使用时稀释50倍 即1×TAE Buffer TBE缓冲液 TBE缓冲液可以配置成 5× or 10×的储液。1x TBE 缓冲液的成分是： 89 mM Tris (pH 7.6) 89 mM boric acid 2 mM EDTA 10x TBE 储

苏木精-伊红染色法 ( Hematoxylin-Eosin staining )，简称HE染色法 ，切片技术里常用的染色法之一 。苏木精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 实验步骤： 1、取样固定 取新鲜的组织样品，加入4 %多聚甲醛组织固定液的EP管中。取样材料应该小而薄，约黄豆粒大小。 2、脱水 采用梯度酒精浓度法脱水。通常选择50%-60%-70%-90%-95%-100%的浓度梯度,各酒精浓度要求准确,95%

在培养贴壁细胞的时候，偶尔会出现细胞接种后贴壁不均匀的情况。有的地方长得非常密集，有的地方却太稀疏。虽然这对于常规培养并不算大问题，但有时则可能影响后续的实验进程。 所以一旦遇到贴壁不匀，建议排查原因并优化操作方案。 本文中将细胞贴壁不均匀总结归纳为四种情况： 局部生长密集，密集处呈不规则分布 原因：一般是接种时没有混匀，或者细胞传代时没有消化彻底从而形成细胞团块导致的 解决方案：继续培养1-2天，待细胞状

原 位 杂 交 组 织 ( 或 细 胞 ) 化 学 (In situ Hybridization Histochemistry ， ISHH) 简 称 原 位 杂 交 (In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的 DNA 或 RNA 为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。 一、合成RNA探针 1、设计探针引物 RNA探针长度500bp最为合适。一轮引物不添加启动子序列，二轮引物在正向引物的5端加上T7启动子序列，在反向引物的5端加上SP6启动子序列。 2、探针合成 用未添加启动子序列的引物克隆出探针序列的DNA模

免疫印迹（Western blot, WB）是分子生物学中检测复杂生物提取物中特定蛋白质存在的最常用方法之一。WB除了能证明某样品中含有某种蛋白之外，其最为重要的作用是比较不同条件下或者不同组织中，目的蛋白表达量的相对多少——即为蛋白表达水平最直接的证据。要衡量蛋白的表达水平，前提条件就是等量的上样量，以确保目标蛋白变化具有可比性。内参的意义就是保证上样量的一致。 在Western Blot中使用内参其实就是在WB过程中另外用内参对应的抗体

是不是非特异带？ “出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论： 第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences ”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms。在进行实验前，需要比对每个剪接体造成的变化是否影响了目标蛋白的对应结构域，进而 判断本研究种

"铁死亡"（Ferroptosis）最近几年一直是科研界的焦点，其研究热度只增不减。对于这一细胞死亡方式的检测指标，你或许还不太熟悉，不用担心，我们已经为你整理了一份详尽的清单。 1 细胞活性检测：铁死亡会导致细胞活力下降，可以通过MTT、CCK-8等细胞活性实验来评估。 2 脂质过氧化物：铁死亡的一个关键特征是脂质过氧化的积累，可以通过检测丙二醛（MDA）和脂质过氧化产物（LPO）来衡量。 3 二价铁离子：细胞内的亚铁离子（Fe²⁺）积累

实验室中常常使用的各类溶液种类繁多，且配制方法五花八门，是否挑花眼了呢?本文总结了近三十种常用溶液、缓冲液、培养基的配制方法，涵盖了分子生物学、蛋白分析、细胞培养、微生物培养等各个领域。 核酸电泳之 TBE、TAE 和 MOPS 缓冲液 三羟甲基氨基甲烷(Tris)是一种应用非常广泛的有机试剂。它及其衍生物被广泛应用于生物化学和分子生物学实验中的缓冲液的制备，可用于制作药物、有机合成、生物缓冲剂等。 用途：可以用于进行试剂的配制

载体 在Cohen和Boyer的实验中，两种质粒都能在E. coli中复制。因此，这两种质粒都可以作为载体，使重组DNA得以复制。所有基因克隆实验都需要这样的载体，我们称之为载体（Vector），但典型的基因克隆实验只涉及一个载体，以及一个依赖于载体进行复制的外源DNA片段。外源DNA没有复制起点，即DNA复制开始的地方，因此除非将其放入具有复制起点的载体中，否则它无法复制。自20世纪70年代中期以来，已经开发了许多载体；这些载体分为两大类：质粒（pl

在所有RNA实验中，最关键的因素是分离得到全长的RNA。而实验失败的主要原因是核糖核酸酶（RNA酶）的污染。由于RNA酶广泛存在而稳定，一般反应不需要辅助因子。因而RNA制剂中只要存在少量的RNA酶就会引起RNA在制备与分析过程中的降解，而所制备的RNA的纯度和完整性又可直接影响RNA分析的结果，所以RNA的制备与分析操作难度极大。 在实验中，一方面要严格控制外源性RNA酶的污染；另一方面要最大限度地抑制内源性的RNA酶。RNA酶可耐受多种处理而不

WB 技术颇具挑战性，尤其是磷酸化蛋白的 WB 检测，更是困难重重！这是因为细胞裂解后，蛋白酶和磷酸酶会被释放出来，它们可能会降解或修饰蛋白质，进而对检测结果产生影响。那么，我们该如何应对呢？ 首先看下磷酸化蛋白的作用都有哪些？ 细胞信号传导研究：检测激酶活性和磷酸化蛋白的变化，研究细胞内信号通路的激活或抑制。 疾病机制研究：例如，在癌症研究中，磷酸化蛋白的异常变化可能与肿瘤发生、发展和转移相关。 药物研发：检

流动相是影响液相色谱的关键因素。一个理想的液相色谱流动相溶剂应具有低粘度、与检测器兼容性好、易于得到纯品和低毒性等特征。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，但是如何配制。选择配制的方法不同，分析结果特别是保留时间，是会有显著差别的。高效液相色谱法中的流动相主要用水性溶剂、有机溶剂或它们的混合液，水性溶剂也常用于缓冲液。常因资料上表示的内容和实际的配制方法不同，而产生流动

免疫荧光染色是实验室常用的技术之一，但在操作过程中，有许多需要注意的细节，任何一个环节的失误都可能导致实验失败。本文将为您介绍免疫荧光染色的注意事项，并附上零失误封片技巧。 1. 抗体选择：选择针对您研究的目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体，一抗的浓度需要预实验摸索。一抗浓度过高(本身荧光实验，一抗的浓度就较高)，也是造成自发荧光强的重要原因。 2. 抗体稀释：根据抗体说明书建议，使用合适的稀释液和稀释比例进行

这是一个奇怪的问题，也是平时用的不多的问题，经常是离心3500rpm、5min或者1500rpm、5min或3000rpm、15min，但是有的文献显示需要离心力为400g（离心尿液），那么400g的离心力是不是等于1500rpm呢？今天就来说说这个问题，看看是不是您想要知道的答案。 PART01：什么是离心力？ ★在牛顿力学中，离心力是一种惯性力（也称为“虚拟力”或“伪力”），当在旋转的参照系中观察时，它看似作用于所有物体，它被指向远离平行于旋转轴并通过坐标系原点的轴。

定义：细胞转染是指将外源分子如DNA，RNA等导入真核细胞的技术。 应用：在研究基因功能、调控基因表达、突变分析和蛋白质生产等生物学试验中。 简介：转染，是将外源性基因导入细胞内的一种专门技术。随着基因与蛋白功能研究的深入，转染目前已成为实验室工作中经常涉及的基本方法。 一、转染的途径大致可分为物理介导、化学介导和生物介导三类： 1.物理介导：电穿孔法、显微注射和基因枪属于通过物理方法将基因导入细胞的范例。 2.化学

活性氧（ROS）的流式检测通常是通过使用荧光探针如DCFH-DA来监测细胞内活性氧水平的变化。以下是该检测方法的一些关键步骤和原理： 01选择荧光探针常用的荧光染料是DCFH-DA，它能够进入细胞并在细胞内被酯酶水解成DCFH。DCFH随后可以被细胞内的活性氧氧化，生成发荧光的DCF。 02DCFH-DA是一种用于检测活性氧ROS的荧光探针，全称为2,7-二氯荧光素二乙酸酯。其工作原理为：DCFH-DA本身没有荧光，但可以自由穿过细胞膜，一旦进入细胞，它会被细胞内的酯

1 蛋白Marker的作用 要了解蛋白Marker的作用，首先需要了解SDS-PAGE电泳分离蛋白的原理，在电泳中，分子量越小的蛋白遇到的阻力更小，移动得越快，跑到凝胶前沿；分子量越大的蛋白遇到的阻力更大，移动得更慢，留在凝胶的上端（注意这和分子筛层析原理不同）。为了确认目标蛋白的分子量，就需要一个参考组，让具有指示性的蛋白Marker与样品一起电泳，由于蛋白Marker分子是确定的，就可以通过目标蛋白位置与蛋白Marker比对，判断其分子量大小。 蛋

为了缩小选择范围，实验中通常要考虑以下几个方面： 1. 分析或者应用类型 2. 样品的性质 3. 样品的物种 4. 一抗的宿主物种 5. 抗体的标记和检测 1 应用 识别相同蛋白的不同抗体，由于识别位点不同，决定了不同的使用用途。例如，许多抗体识别位点位于折叠蛋白的内部，因此抗体只能识别降解或变性蛋白，这样的抗体往往只能应用于western blotting。有的抗体能够识别自然折叠状态上的表位。这样的抗体可应用于IHC、IF、FACS等应用。 当搜寻用于免疫组

荧光原位杂交（Fluorescence in situ hybridization FISH）是一门新兴的分子细胞遗传学技术，是 20 世纪 80 年代末期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术。目前这项技术已经广泛应用于动植物基因组结构研究、染色体精细结构变异分析、病毒感染分析、人类产前诊断、肿瘤遗传学和基因组进化研究待许多领域。 FISH的基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知的单链核酸进行异性

液氮罐的定义 采用真空绝热保温技术制作的容器，放液氮于其中，利用液氮常压下沸点-196℃的原理，实现生物样本长时间低温保存的设备。 液氮罐的分类 根据液氮罐的不同指标，液氮罐有不同的分类。 按用途分 按用途分，可以分为液氮存储罐和液氮运输罐两种。其中液氮存储罐适合于不同容量长时间的稳定存储，罐体不能用来运输，运输存在安全隐患。液氮运输罐具有体积小和减震结构设计，适用于少量样本的转移存储和短距离运输使用。 按液

1蒸馏水（Distilled Water） 蒸馏水是实验室常用的一种纯水。蒸馏水能够去除自来水里大部分的污染物，但是无法去除挥发性的杂质，如二氧化硅、氨、二氧化碳、以及一些有机物。 新鲜的蒸馏水是无菌的，但经过储存后细菌易繁殖，因此建议不要长时间存放。 另外，储存蒸馏水的容器也很讲究，需要尽量选择非惰性物质制造的容器，不然，容器中的离子和塑形物质会析出造成蒸馏水的二次污染，无法使用。 在早期实验室中，由于蒸馏水制备方便，因

细胞铺板时，常出现的细胞分布不均匀现象。 铺板成功的关键在于（1）细胞一定要消化好！！（2）铺板前要混匀！把可能的细胞团尽可能分开！！ 细胞铺板实验 主要分为3大步骤：收集细胞→细胞计数→细胞铺板。 一、收集细胞，制作单细胞悬液 这里需注意： 消化细胞需要选择适用的消化液、适当的消化温度和时间。建议新手或者养的是一个新细胞时，自己要观察最佳胰酶消化时间及浓度。 消化后需要轻轻拍打细胞贴壁面，震落细胞。 一般用1000