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虽然质粒提取是非常简单的操作，但是很多人对于其中的原理并非清楚。只知道在使用试剂盒的时候，加入溶液1，2，3，不知道溶液中含有的具体成分，也不清楚，每一种成分所起到的作用。 细胞中存在蛋白质，chromsomal DNA，plasmid DNA，RNA，我们的目的是把质粒DNA给提取出来，而且不能掺杂其他的生物大分子。蛋白质可以让它沉淀，RNA可以加入RNase降解，可以看出，质粒提取最关键的问题是如何把chromosomal DNA和plasmid DNA给区分开来。 细菌没有细胞核，

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1、动物造模：大小动物手术模型、药物诱导模型模型评价检测：行为学检测、影像检测、生化生理指标检测、等； 2、细胞实验：细胞培养、细胞爬片、细胞转染、流式细胞术、慢病毒包装细胞划痕实验、细胞迁移、细胞侵袭、稳定株筛选、原代细胞分离、等 ； 3、病例学检测：硬组织切片、不脱钙切片、脱钙、软化、包埋、切片、染色、特殊染色、免疫组化、免疫荧光、病理图像采集、等；

1、引物最好在模板cDNA 的保守区内设计 DNA序列的保守区是通过物种间相似序列的比较确定的。在NCBI上搜索不同物种的同一基因，通过序列分析软件(比如DNAman)比对 (Alignment)，各基因相同的序列就是该基因的保守区。 2、引物长度一般在15~30碱基之间 引物长度(primer length)常用的是18-27 bp，但不应大于38，因为过长会导致其延伸温度大于74℃，不适于TaqDNA 聚合酶进行反应。 3、引物GC含量在40%~60%之间， Tm 值最好接近72℃ GC含量(composition )过高或过低都不利于

线粒体调节炎症的机制是一个复杂的过程，涉及多个信号通路和分子交互。以下是对线粒体调节炎症机制的清晰归纳： 线粒体DNA（mtDNA）的释放与先天免疫激活： 当线粒体受到损伤或功能障碍时，mtDNA可以从线粒体中被释放到细胞质中。 释放的mtDNA包含大量CpG岛，其结构能被Toll-like-receptor 9（TLR9）识别，进而激活NF-κB信号通路，导致促炎基因（如TNFα、IL-6）表达升高。 mtDNA还可以直接激活NLRP3炎症小体，进而激活caspase-1信号通路，促进IL-1β和IL-18等促

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线粒体，糖酵解，T细胞很多年来一直是研究热点，那么究竟是什么让这篇斩获16.6呢？就跟小助手来一起学习一下思路吧！ 1.细胞代谢与T细胞耗竭关系：文章通过分析疲惫T细胞亚群，揭示了其在转录、表观遗传、代谢等方面存在明显的差异，特别是与线粒体基因表达和代谢重编程之间的关系。 2.线粒体缺陷导致T细胞耗竭：通过使用线粒体不足的T细胞的基因小鼠模型，文章阐明了代谢转变足以诱导Tpex细胞中与疲劳相关的基因表达程序。 3.氧化还原平

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为了排除某些因素对PCR结果的影响，PCR实验需要对照实验。PCR的阳性对照是Marker，推测PCR产物长度，判断PCR产物是否是目的片段。PCR的阴性对照是PCR的空白管，除了模板不加之外，其成分与其他管一样，证明没有其他模板污染。 由于目前所用的PCR仪器自动化程度较低，操作步骤较为繁杂，人为因素大，这就不可避免地会出现不同程度的误差。轻微的污染、加量的误差等均可导致结果较大的差异，甚至阳性和阴性出现两种迥然不同的结果。在分析测定

一、试验动物血液采集一般知识 对动物的终末和非终末采血技术（如麻醉，取血体积）是有区别的，终末采血指的是以动物死亡为实验结束时采血与在清醒动物身上单次或多次采血的情况是迥然不同的。 非终末采血可分为单次和多次采血，单次采血量低于动物总血量的15%对动物不会有明显影响。然而，若取血量为总血量的15%~20%时，则会出现心排血量或血压降低。取总血量的30%~40%会引起缺血性休克。若取血达40%可引起约50%的猪和大鼠死亡。单次采血

肺动脉高压 ( PAH) 指肺动脉压力异常升高的一种血流动力学和病理生理状态，是一种致命性心肺疾病，最新流行病学数据显示特发性和遗传性 PAH 发病率为每百万居民 5 例，患病率为每百万居民 25 例，并且逐年增加趋势明显。 PAH 发病机制非常复杂，涉及炎症、氧化应激和代谢转换等机制，尽管对 PAH 及其发生机制研究取得了很大进展，但目前最先进的治疗方法仍然不能靶向正在进行的重构过程，而是通过调控涉及维持血管张力的信号通路来治疗PAH，5

2006年12月，CDE颁布《细胞毒类抗肿瘤药物非临床评价的技术指导原则》至今，已有多个肿瘤药上市，造福千万大众。提到肿瘤药，大家想到的是先用”小白鼠“做实验，然后再用到人类的身上，那么在小白鼠身上长出的肿瘤是一模一样的吗？ 那么带着这个问题，小助手带着大家一起看看实验动物的肿瘤体积的测量方法。首先，选择合适的实验动物接种肿瘤细胞。 一、选择哪种实验动物接种肿瘤细胞？ 肿瘤试验的瘤株主要有两种，一种是鼠源瘤株，一

胃癌(gastric cancer，GC)是世界上最常见的恶性肿瘤之一，属全球四大肿瘤，发病率及病死率都较高。目前胃癌的病因及发病机制尚不太明确，胃癌的浸润和转移都是影响治疗、预后及提高生存率的重要因素，建立最接近人体胃癌的动物模型，能很好的重现胃癌患者的临床发病、侵袭和转移过程是研究该病发病机制及治疗的重要前提跟保障。这也必将为探寻胃癌的发病机制、筛选治疗药物及基因治疗的探索提供途径。 实验动物的选择 可用于构建胃癌模型

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抑郁症是目前常见的一种心理障碍疾病，是全球疾病负担的主要因素之一，具有较高的致残率，其症状标准以显著而持久的心境低落为主要特征。而研究发现抑郁症症状时间越长，患者认知障碍越严重，强烈的悲观情绪甚至会导致自杀。 近年来，抑郁症的发病率越来越高。据世界卫生组织统计，全球抑郁症发病率约 11% ，高发人群多为脑力劳动者。一项对抑郁症患者进行 10 年随访的研究发现，65% ～ 70% 的抑郁症患者因会出现多次复发的情况而需要进

肺栓塞（pulmonary thromboembolism，PTE）是由于内源性或外源性栓子堵塞肺动脉主干或分支引起肺循环障碍的临床和病理生理综合征，由于肺栓塞未受到足够重视，并且发病及临床表现的隐匿性和复杂性，以致漏诊、误诊率高，在死前被正确诊断的病例仅为39%～50%。同时，在过去的几年里，我国PTE的患病率呈三倍以上增长。其发展迅速、临床表现复杂、病死率高，严重危害人们的身心健康。对该疾病进行深入研究，建立一稳定可靠的动物模型有着重要的科

酒精性肝损伤( alcohol liver disease，ALD)是指由于饮酒而导致的肝代谢损伤的疾病。随着现阶段生活水平的提高, 酒精性肝病的发病率逐年提高。该种疾病早期表现为脂肪肝，如果不及时干预，进一步发展会成为肝炎、肝纤维化及肝硬化等严重疾病。酒精性肝损伤模型可分为急性肝损伤动物模型与慢性酒精性肝损伤模型，今天小助手为宝子们介绍其几种常见的造模方法及各自的特点。 一、急性酒精性肝损伤模型 建立急性酒精肝损伤模型一般采用大鼠或小

非酒精性脂肪性肝病（non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD）是一种无酒精滥用的肝病综合征，包括单纯性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝纤维化和肝硬变。可从单纯性脂肪肝经非酒精性脂肪性肝炎（NASH）发展为肝纤维化，甚至导致肝硬化、肝细胞癌（HCC）或肝功能衰竭等终末期肝病。 一、模型动物的选择 常用的实验动物有大鼠、小鼠、家兔等，其中大鼠和小鼠的应用最为广泛，大鼠以 Wistar 和 Sprague Dawley（SD）为代表；小鼠的品系则更加多样，其中C57BL/

动物的选择 创伤性视神经损伤动物模型常用哺乳动物包括大鼠、家兔、猫或犬类等。大鼠是最经济的小型标准动物之一，其眼球壁的色素层颜色较深，在分离视网膜时易于分辨，不易破损，可保持视网膜的完整性，较易实施视网膜铺片，所以最常被选用。 造模方法 一、 各种大鼠的创伤性视神经损伤模型的制作 01视神经横断伤大鼠模型 视神经横断伤大鼠模型是各种视神经损伤模型中最易建立，并且最易于统一损伤标准的模型。 造模方法：用水合氯醛

高血压病是世界公认的心血管疾病的主要危险因素。所有心脑血管病相关死亡，约半数由高血压所致。临床上常用的抗高血压药，在降压及改善症状方面尚存在许多不足。现代医学对高血压的确切病因及发病机制尚存在许多未知，加强对高血压病因及发病机制的研究，开发出更有效的治疗药物是非常必要的。而实验研究离不开高血压动物模型，好的动物模型能够较好地模拟疾病状态，为全方位的研究提供可能。 动物的选择 常见的动物模型类别有鼠、

脊髓损伤（spinal cord injury，SCI）是由于椎体的移位或碎骨片突出于椎管内造成脊髓或马尾神经不同程度的损伤，是一种致残致死率较高的中枢神经系统性损伤，能够导致不同程度的肢体瘫痪、感觉或自主功能丧失等一系列的并发症。 关于脊髓损伤的治疗，目前尚缺乏明确有效的手段。原因是，脊髓损伤后的病理生理变化机制十分复杂，目前尚未能对其进行全面、深入的了解及认识。 建立可靠性高、重复性好的动物模型是研究脊髓损伤机制，观察损伤

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白血病是造血组织的恶性增殖性疾病，其特点是骨髓及其它造血组织中大量无核细胞无限制增生，进入外周血液，临床表现以骨髓、脾、肝等造血器官中的白血病细胞恶性增生与肿大，并浸润到全身各组织脏器中，伴有不同程度的贫血、出血、感染发热以及骨骼疼痛。 常见的白血病模型 A.诱发模型；B.移植模型；C.基因修饰模型。 AML模型分析 急性髓系白血病（AML）是由于骨髓中干细胞和祖细胞克隆突变或异常增殖导致的一种恶性肿瘤。常用的构建AML

动物的选择 癫痫发作可以通过急性损伤或遗传影响等方式出现在几乎所有具有中枢神经系统的动物上，所以癫痫模型动物范围非常广泛。 啮齿类动物 啮齿类动物是研究神经发育和生物医学的重要品种，在细胞放电特征、突触功能、神经递质的作用等方面相关的报道非常多。大鼠、小鼠等啮齿类动物仍是迄今为止最常见的动物模型。虽然，小鼠和人类有很多相似之处，然而，两者在某些基因、蛋白质功能方面存在一定差异。 同样的，即使是相同物种

12月12日，Nature新闻板块（news）发布了一个令人震惊的消息，2023年，超过1万篇研究论文被撤稿，打破了年度撤稿纪录。而科研诚信专家表示，这只是冰山一角。 文章指出：2023年撤稿的研究论文超过了1万篇，差不多是2022年的两倍，成为有史以来最高的年度纪录。值得注意的是，十年前，论文撤稿数量不到2000。 分析发现，过去二十年里，在众多科研产出大国中，沙特阿拉伯、巴基斯坦、俄罗斯和中国的论文撤回率最高。 80%的撤稿来源于Hindawi出版社 20

抑郁症常用动物模型 由于人类研究的固有局限性以及抑郁症发病机制尚不清楚，目前尚无明确的实验指标，因此动物模型的使用仍是识别抑郁症神经机制和发现新的药物以及治疗方法的必要步骤。目前，常用的抑郁症造模方法主要包括慢性不可预知性温和应激（chronic unpredictable mild stress，CUMS）、绝望模型( behavioral despair，BD)和获得性无助( learned helplessness，LH)，药物造模、手术造模。 啮齿动物抑郁症造模方法 a.早期生活压力模型通常由母体分离引起；

1研究背景及重要性 在立项依据开始，需明确申请人所要研究的“临床问题”的重要性。有一些悬而未决的问题、或者在临床工作中发现一些亟需改善改进的点。如，高血压引起的心脏疾病高发，并趋于年轻化，而目前其病因发生机制不明，或治疗的局限性等。注意，临床问题的选择需要聚焦，对于面青地这样的课题，一个项目对应一个临床问题足以。 如下案例是不可取的：申请人在本项目中的研究，既涉及到了诊断，又兼顾到了预防，还能实现治疗

在动物实验研究中，采血是动物实验中最常用的操作技术之一，经常要采集实验动物的血液进行检测分析。MDL在具体实验过程中，满足“3R”原则的同时，选择对动物的疼痛、组织损伤及压力最小的采血方法，降低实验过程中与压力相关的福利指标，如血清或血浆中的皮质酮水平、血糖值、生长激素或泌乳素、心率、血压以及行为学等，将应激降至最小程度，这既考虑到了动物福利，也获得了良好的科学数据。 一、采血位点有哪些？ 依据采血位点不

神经退行性疾病（Neurodegenerative disease）是神经元结构或功能逐渐丧失甚至死亡而导致认知或功能障碍的一类疾病。阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）、帕金森病（Parkinson’s disease, PD），以及因“冰桶挑战”而被大家熟知的肌萎缩性侧束硬化症（Amyotrophic lateral sclerosis, ALS）等，都属于神经退行性疾病。探索神经退行性疾病的关键指标，有望改善临床检查和诊断、治疗的现状。 一、阿尔茨海默病的关键指标 01 Amyloid beta Amyloid beta (Aβ,β-Amyloid, β-淀粉

作为所有真核细胞的能量中枢，线粒体功能正常是维持细胞稳态的关键。一旦细胞和组织中ROS（活性氧）过度积累，则会导致线粒体损伤，引发线粒体DNA受损、膜电位改变、氧化蛋白活性改变，最终破坏细胞代谢稳态并导致细胞死亡。因此为了维持稳态平衡，细胞进化出了一种有效的线粒体质量控制手段—线粒体自噬（Mitophagy）。 一、什么是线粒体自噬？ 在活性氧(ROS)胁迫、营养缺乏、细胞衰老等外界刺激的作用下，会导致线粒体DNA(mtDNA)突变逐渐累

急性感染后，CD8+ T细胞增殖并分化为细胞毒性T淋巴细胞(ctl)以消除感染的靶细胞。ctl的分化与转录、表观遗传和代谢重组相平行，以支持其克隆扩增和效应功能，如细胞因子分泌和细胞毒性。在病原体被清除和炎症消退后，大多数效应T细胞死亡，只有少数淋巴细胞作为长期记忆T细胞保留下来。 然而，当抗原不能被消除时，例如在持续性感染和癌症中，持续的抗原受体刺激会驱动另一种分化轨迹，即T细胞耗竭。耗竭的T (Tex)细胞在表型上表现为PD-1、Tim

干货分享 | WB实验“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，看完这篇文章就知道了！MDL科研助手 2023-11-27 17:00 发表于河北“出现杂带”以及“条带位置不符合预期”，这两种情况需要分开讨论： 第一种情况：蛋白转录及翻译后的修饰，该因素是引起杂带的最常见原因。 转录后，由于选择性剪切的作用，同一个转录本会翻译出不同大小的蛋白，这类蛋白称为该蛋白的剪接体。 在UniProt查询蛋白时，可以在“Sequences ”部分看到该蛋白已报道过的Isoforms